In-Fusion^®クローニング

各種クローニング法をシミュレーションできますが、ここでは具体例としてIn-Fusion^®クローニングをやってみましょう。

今回は、pCDNA3.にLuciferase遺伝子をクローニングするというシミュレーションを行います。使用するデータを下記よりダウンロードしSnapGeneで読み込みます。ファイルの読み込みはSnapGene基本操作：3.ファイルを読み込むを参照して下さい。

ルシフェラーゼ遺伝子の配列は、pGL3-Promoterを使います。

In-Fusion^®クローニング

ツールバーにある「アクション（A）」から「In-Fusion®クローニング（F）」を選択して、「断片を挿入（F）」をクリックしてください。

「断片」タブを選択し、右側の「断片のソース」のドロップダウンリストからpGL3-Promoter.dnaを選択します。

pGL3-Promoter.dnaファイルをダウンロードしたのみでSnapGeneで読み込んでいない場合、ドロップダウンリストにpGL3-Promoter.dnaは表示されません。ドロップダウンリストに表示されていない場合は、ブラウズをクリックしダウンロードしたファイルを選択下さい。

「ベクター」タブで置換したい部分を選択し、「断片」タブで挿入したい部分をクリックします。

「産物」タブを選択し、右側の「オーバーラップしているPCRプライマーを選択」をクリックします。Tm値やオーバーラップする塩基数を設定して「プライマーを選択します」をクリックすると完了です。

シークエンスタブでクローニング後の配列を確認したり、プライマータブで実際に使用するプライマーの配列を確認できます。

右下の「産物作成」で任意のクローン名（今回は “pCDNA3.1-Luc” ）を付けて「クローン」をクリックすると、新しいプラスミドマップを作ることができます。履歴タブでIn-Fusion®クローニングの過程も確認できます。

新たに作成したプラスミドマップは保存されていませんので、任意のフォルダの保存するのを忘れないようにしてください。