In-Fusion^®クローニング

SnapGeneは各種クローニング法をシミュレーションすることが可能です。このチュートリアルでは In-Fusion^®クローニングのシミュレーションをご紹介します。

今回は、pCDNA3. に Luciferase遺伝子をクローニングするというシミュレーションを行います。使用するデータを下記よりダウンロードしSnapGeneで読み込みます。ファイルの読み込みはSnapGene基本操作：3.ファイルを読み込むを参照して下さい。

ルシフェラーゼ遺伝子の配列は、pGL3-Promoter を使います。

In-Fusion^®クローニング

ツールバーにある「アクション（A）」から「In-Fusion^®クローニング（F）」を選択して、「断片を挿入（F）」をクリックしてください。

「断片」タブを選択し、右側の「断片のソース」のドロップダウンリストから pGL3-Promoter.dna を選択します。

pGL3-Promoter.dna ファイルをダウンロードしたのみでSnapGeneで読み込んでいない場合、ドロップダウンリストに pGL3-Promoter.dna は表示されません。ドロップダウンリストに表示されていない場合は、ブラウズをクリックしダウンロードしたファイルを選択下さい。

「ベクター」タブで置換したい部分を選択し、「断片」タブで挿入したい部分をクリックします。

「産物」タブを選択し、右側の「オーバーラップしているPCRプライマーを選択」をクリックします

Tm値やオーバーラップする塩基数を設定して「プライマーを選択します」をクリックすると完了です。

シークエンスビューでクローニング後の配列を確認したり、プライマービューで実際に使用するプライマーの配列を確認できます。

右下の「産物作成」で任意のクローン名（今回は “pCDNA3.1-Luc” ）を付けて「クローン」をクリックすると、新しいプラスミドマップを作ることができます。

履歴ビューでIn-Fusion®クローニングの過程も確認できます。

新たに作成したプラスミドマップは保存されていませんので、任意のフォルダの保存するのを忘れないようにしてください。